高二年级第二学期生物学科 总第 课时教案
课题 蛋白质的分离与纯化方法
使用时间： 主备人：
教学目标：
1、知识与技能：
掌握蛋白质的分离与纯化方法， 知道从生物材料中提取芳香油
2、过程与方法：
掌握蛋白质的分离与纯化三种方法的比较过程
3、情感态度价值观：
培养学生科学实验的观点。
教学重点：
蛋白质的分离与纯化
教学难点：
蛋白质的分离与纯化， 从生物材料中提取芳香油
教学方法：
自主、合作、探究学习。
教具使用：
无
共案部分
个案部分
教学过程
教师主导活动
学生主体活动
课前：
布置学习目标和预习提纲，要求学生完成预习任务，下发及收缴批改导学案（附导学案）
学生进行预习，完成导学案。
课中：
对上节课存在问题进行点拨。
新授：
根据学生自学情况，引导学生分析主要的问题。强调以下几点。
【思维点拨】
1．说明用透析法、离心沉降法和电泳等方法纯化蛋白质的原理和大致过程。
2．影响电泳泳动速度的主要因素有哪些?这些因素是如何影响泳动速度的?
3．“血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳”实验最关键的一步是什么?你能说出这一步的操作要求吗?
4．漂洗后的薄膜上可以看到几条色带?分别代表什么?
5．植物芳香油提取的常用方法有哪些?这些方法的原理各是什么?
【疑难解析 】
1．蛋白质的分离纯化： ①根据蛋白质溶解度不同的分离方法——蛋白 质的盐析： 中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析，将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子(如硫酸铵的SO：一和NH})有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失永”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。
②根据蛋白质分子大小的差别的分离方法——透析： 透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。 ③根据蛋白质带电性质进行分离——电泳法： 各种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同从而得以分开。值得重视的是等电聚焦电泳，这是利用一种两性电解质作为载体，电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度，当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时，到达各自等电点的pH位置就停止，此法可用于分析和制备各种蛋白质。 2．实验原理： 醋酸纤维薄膜电泳(CAME)是以醋酸纤维薄膜(CAM)作支持物的一种区带电泳技术，将血清样品点样于醋纤膜上，在pH为8．6的缓冲液中电泳时，血清蛋白质均带负电荷移向正极。由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。电泳后，CAM经染色和漂洗，可清晰呈现清蛋白、α1一球蛋白、α2一球蛋白、β球蛋白、 γ一球蛋白5条区带，比色即可计算出血清各蛋白组分的相对百分数。
布置学生课堂检测，并重点提示。
学生对上节存在问题进行讨论。
学生自学基础知识。
学生根据导学案内容讨论并展示个人、小组成果。
思考：
蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法：
抽提方法：
纯化主要是根据：
常用的方法：
醋酸纤维薄膜电泳的实验的基本步骤：
色带：
学生完成课堂检测
课后：
布置课外作业及下一节预习提纲。（见导学案）
学生完成课外作业及下一节预习。
板书设计
生物成分的分离与测定技术
蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法：
抽提方法：
纯化主要是根据：
常用的方法：
醋酸纤维薄膜电泳的实验的基本步骤：
色带：
教学札记
三、其他补充教学资料（各位教师根据各班教学特点选择补充资料，可另附纸）
高二生物生物成分的分离与测定技术导学案
使用时间： 编制人：
一、学习目标：
知道蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法，蛋白质抽提方法，掌握蛋白质的分离与纯化方法。
二、知识构成：
1．蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法有： 根据蛋白质的不同特性，分别可选择哪些抽提方法？ 、
、
蛋白质的纯化主要是根据 之间以及 之间在 、 、 、 等方面存在的差异进行的。常用的方法包括 、 、 等。
2．用电泳分离纯化蛋白质时，泳动速度主要取决于 ，即 。此外， 、 等因素对泳动速度也有影响。
3．血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的实验的基本步骤包括： 、
、 、 、 、
、 、 、 、 。
4．浸泡醋酸纤维薄膜前，用笔做记号是在 (填“光泽面”或“非光泽面”)；点样是在 (填“光泽面”或“非光泽面”)；平悬薄膜时， (填“光泽面”或“非光泽面”)朝上。
5．经电泳后，可以在薄膜上看到 条色带，它们分别是 、
、 、 、 。
'6．植物芳香油的提取方法有 和 等。
三、学法和自检：
本节内容主要通过看书、分析蛋白质的提取、分离、纯化的不同方法。
动手试一试：
[1]盐析法分离蛋白质的原理是 ( )
A．破坏蛋白质的一级结构 B．破坏蛋白质的二级结构 C．破坏蛋白质水化膜而改变溶解度 D．使蛋白质发生变性沉淀
[2]利用透析法将蛋白质和其他小分子物质分离的原理是 ( )
利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性 B．利用蛋白质分子的水溶性
C．利用蛋白质分子的胶体性 D．利用蛋白质分子所带电荷
[3]．下列关于血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验的说 法不正确的是 ( )
A．实验所用的巴比妥缓冲液的pH为8．6 B．点样是在薄膜的光泽面上进行的
C．实验后可以得到五条色带 D．整个实验最关键的步骤是点样
[4]．有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的pH分别为 4．5、5．2、6．6、7．2，电泳时欲使其中三种泳向正极，则缓冲液的pH应该是 ( )
A．2．0 B．5．0 C．6．0 D．7．0
课题 生物成分的分离与测定技术
四、达标检测
1．(多选)在蛋白质粗提取时，破碎细胞的方法有 ( )
A．研磨法 B．超声波法 C．酶解法 D．机械破碎
2．分离水溶性蛋白质所选用的提取溶剂是( )
A．酸性溶液 B．碱性溶液 C．中性缓冲液 D．有机溶剂
3．(多选)纯化蛋白质的原理是根据不同蛋白质之 间以及蛋白质与其他分子之间在哪些等方面存 在的差异进行的 ( )
A．分子大，B．溶解度 C．所带电荷的多少 D．吸附性质
4．某蛋白质等电点为7．5，在pH6．O的缓冲液中进 行自由界面电泳，其泳动方向为 ( )
A．向负极移动 B．向正极移动 C．不运动 D．同时向正极和负极移动
5．在pH 5．12时进行电泳，哪种蛋白质既不向正极 移动也不向负极移动 ( )
A．血红蛋白：pI(等电点)一7．07 B．鱼精蛋白：pI一12．20
C．a1一球蛋白：pI一5．06 D．B一球蛋白：pl=5．12
6．血清蛋白电泳时通常用pH 8．6的缓冲液，此时 各种蛋白质所带的电荷为 ( )
A．清蛋白带正电荷，其他蛋白带负电荷 B．清蛋白带负电荷，其他蛋白带正电荷
C．各种蛋白均带正电荷 D．各种蛋白均带负电荷
7．(多选)支持物电泳常采用的支持物有 ( )
A．滤纸 B．醋酸纤维薄膜 C．大分子凝胶 D．纤维素
五、学习小结和课外作业：
1、学习小结：
2、上本作业：列举蛋白质粗提取时次报的破碎、蛋白质的抽提、纯化方法。
3、课本：64页1 2 3 4 5
4、补充练习：
8．请根据血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验回答下 列问题：
(1)实验所用的主要试剂有：
(2)实验所用的缓冲液的pH为 ，因为 。
(3)点样应点在薄膜的 面，方法是用 在血清中蘸一下，在离薄膜一端 cm处轻轻按下，随即提起。
(4)实施电泳时，所用电压为 ，膜宽电流强度 ，时间 。
(5)实验结果时，薄膜上呈 条色带，分别代表 。
9．选择正确答案的序号。、清蛋白一球蛋白、一球蛋白、一球蛋白、球蛋白
A．清蛋白 B．α1一球蛋白 C．α2--球蛋白 D．β一球蛋白 E．γ一球蛋白
(1)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中泳动最快的是 ( )
(2)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中泳动最慢的是 ( )
(3)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中区带最深的是 ( )
(4)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中区带最浅的是 ( )
(5)正常人血清中的各种蛋白质，在pH8．6的缓冲液中负电性最强的是 ( )
(6)正常人血清中的各种蛋白质，在pH8．6的缓冲液中负电性最弱的是 ( )
10．醋酸纤维薄膜电泳可把血清蛋白分成五条带，由负极数起它们的顺序是 ( )
A．γ一球蛋白、α1一球蛋白、α2一球蛋白、β球蛋白、清蛋白
B．清蛋白、β一球蛋白、α1 一球蛋白、α2一球蛋白、 γ一球蛋白
C．γ-球蛋白、βB一球蛋白、α2一球蛋白、α1一球蛋白、清蛋白
D．清蛋白、α1一球蛋白、α2一球蛋白、β球蛋白、 γ一球蛋白
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