1. (2010·浙江理综·T2)在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是( )
A. 用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸
B. 用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体
C. 将重组DNA分子导入烟草原生质体
D. 用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞
【解析】限制性核酸内切酶用于提取目的基因和切割载体，烟草花叶病毒遗传物质是RNA，不能用限制性核酸内切酶切割，A项错误；DNA连接酶可以连接具有相同黏性末端的目的基因和载体，B项正确；受体细胞可以是受精卵和体细胞，也可以是去除细胞壁的原生质体，C项正确；目的基因为抗除草剂基因，所以成功导入目的基因的细胞具有抗除草剂的能力，筛选时应该用含除草剂的培养基筛选转基因细胞，D项正确。
【答案】A
B. 在使用限制酶的同时还需要解旋酶
C. 限制酶1、2、4识别的序列都是由4个脱氧核苷酸组成
D. 限制酶1和2切出的DNA片段可通过T4DNA连接酶拼接
【解析】从图中分析可知限制酶4识别的序列有6个脱氧核苷酸组成；T4DNA连接酶连接的DNA片段，需要互补的碱基序列，限制酶1和2切出的DNA片段不是互补的黏性末端无法通过T4DNA连接酶拼接；使用限制酶切割时无需解旋，不需解旋酶。
【答案】A
5. 以下是几种不同限制性核酸内切酶切割DNA分子后形成的部分片段。回答下列问题：
① ② ③ ④ ⑤
(1)以上DNA片段是由________种限制性核酸内切酶切割后产生的。
(2)若要把相应片段连接起来，应选用________。
(3)找出能连接的对应片段序号是________，写出连接后形成的DNA分子：________________。
【解析】本题是关于DNA重组技术中工具酶的应用，应从限制酶的作用来分析，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定位点进行切割。题中①④的黏性末端相同，是由同一种限制酶切割形成，其他三种片段的末端都不相同，所以这些片段是4种限制性核酸内切酶切割后产生的。DNA连接酶与DNA聚合酶作用不同，DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，将两链上的两个缺口同时连接起来。
【答案】(1)4 (2)DNA连接酶 (3)①和④
6. (2011·福州三中模拟)美籍华裔科学家钱永键和日本海洋生生学家下村修等人因在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面的突出贡献，获得了2008年诺贝尔化学奖。下图是我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
(1)图中通过①、②过程形成重组质粒，需要用同一种限制酶切割目的基因和质粒。限制酶的特点是________________________________。
(2)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是________________________；获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是________________________。
(3)③过程将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________。
(4)以上培育过程中应用到的生物技术主要有________________等。(至少写三项)
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