一、选择题
1．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时 ( )
①可以用相同的培养基 ②都需要使用接种针进行接种
③都需要在火焰旁进行接种 ④都可以用来计数活菌
A．①② B．③④ C．①③ D．②④
2．有关稀释涂布平板法，叙述错误的是 ( )
A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释
B．系列稀释后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面
C．适宜条件下培养
D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落
3．下列对灭菌和消毒的理解不正确的是 ( )
A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子
B．消毒和灭菌实质上是完全相同的
C．接种环用灼烧法灭菌
D．常用灭菌方法有灼烧法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法
4．分离纤维素分解菌的实验过程中，下列操作有误的是 ( )
A．经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上
B．富集培养这一步可省略，但培养的纤维素分解菌少
C．经稀释培养后，用刚果红染色
D．对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上
5．下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是 ( )
A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0. 1 mL，分别涂布于各组平板上
C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时
D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
二、非选择题
6．某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答下列问题：
(1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：________、________、________、________、________。其中提供氮源的是____________________；提供碳源的主要物质是________________________。
(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，配制培养基时各成分要有合适的________。在烧杯中加入琼脂后要不停地________，防止__________________。
(3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入________中灭菌，压力________kPa，温度________，时间________。灭菌完 毕拔掉电源，待锅内压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应____________________。[高考资源网]
(4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入________。把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后，将锅密闭。
(5)从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯________(“内”或“外”)焰灭菌，并且待接种环________后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管在适温下培养，长成菌落后放入________℃冰箱中保藏。
7．富集培养是微生物学中最强有力的技术手段之一。主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定环境条件使仅适应该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分离的微生物的特点，从物理、化学、生物及综合多个方面进行选择，如温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面。下图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。
(1)本实验所需培养基为____________________________________________________，
碳源为__________________。
(2)实验原理是____________________________________________________________。
(3)①→③重复培养的目的是_______________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)⑤的菌落中大部分是降解________的微生物。
(5)⑥为__________组，⑦为________组，设置⑥的目的是______________________。
(6)⑤→⑥采用________法，接种到⑥的培养基中，在操作过程中为防止污染应注意的事项是
________________________________________________________________________。
8．尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题：
KH2PO4
1.4 g
Na2HPO4
2.1 g
MgSO4·7H2O[高考资源网]
0.2 g
葡萄糖
10 g
尿素
1 g
琼脂
15 g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL
(1)此培养基能否用于植物组织培养？________，理由是________________________。
(2)培养基中加入尿素的目的是筛选________，这种培养基属于________培养基。
(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的________和________，实验需要振荡培养，原因是________________。
(4)转为固体培养时，常采用________的方法接种，获得单菌落后继续筛选。
(5)下列材料或用具中：①培养细菌用的培养基与培养皿；
②玻棒、试管、锥形瓶和吸管；③实验操作者的双手。需要灭菌的是：________；需要消毒的是：________(填序号)。
(6)在进行分离分解尿素的细菌的实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有________(填序号)。
①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照
(7)简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理：___________________________
________________________________________________________________________。
9．食品卫生是关系千万人健康和生命的大事，为检测某食品厂乳制品中总菌量和大肠杆菌量是否超标，常采用微生物培养的方法，请回答下列问题：
(1)应配制哪种物理性质的培养基？________，在接种之前，一般对培养基采取________方法灭菌，灭菌后才能保证培养得到的菌落全部来自待测样品。培养基中是 否应该加入全部五大类营养要素？________，为什么？
________________________________________________________________________。
(2)培养基制备好以后，应该将一定量的________的稀释液接种到培养基上，并将接种好的培养基在________________等条件下培养。
(3)待培养一定时间后，对________________进行计数，以得出总菌量的数据，若要得到大肠杆菌量的数据，应该在配制培养基时向培养基中加入________________试剂。
10．生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化学燃料的消耗。科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油(如下图)
(1)用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用________、________方法从油料作物中提取。
(2)筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供________，培养基灭菌采用的最适方法是________法。
(3)测定培养液中微生物数量，可选用________法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测________，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产成本，可利用________技术使脂肪酶能够重复使用。
(4)若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的________技术。
11．炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患传染病。炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列，菌落呈卷发状。对炭疽病疑似患者，可根据噬菌体的宿主专一性，通过实验确诊。
(1)细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得可疑菌落。
(2)细菌鉴定：实验流程如图所示
①对配制的液体培养基等需采取________方法灭菌；实验所用液体培养基的碳源为________(填“无机碳”或“有机碳”)。
②挑选可疑菌落制片后，用________观察，可看到呈竹节状排列的杆菌。
③接种可疑菌后，35℃培养24小时，液体培养基变浑浊，原因是___________________________。
对照组试管中应加入________，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组________(填“高”或“低”)，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。
④对排除的疑似患者及易感人群，可接种炭疽杆菌疫苗，刺激机体产生相应抗体，与产生抗体相关的细胞除T细胞、B细胞外，还有________。
12． (1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外,还要考虑_______、________和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、________、________等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。
(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行_______(消毒、灭菌)；操作者的双手需进行清洗和________；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能____________________________________。
(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的________。
(4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的
________________________________________________________________________。
(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_______________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(6)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。
13.苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株。筛选的主要步骤如图所示：①为土壤样品。请回答下列问题：
(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入________作为碳源。②中不同浓度碳源的培养基________(A.影响；B.不影响)细菌的数量。如果要测定②中活细菌数量，常采用________________法。
(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长。④与⑤培养基的主要区别在于
________________________________________________________________________；
使用________法可以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养？
(3)如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小？
(4)实验过程中如何防止其他微生物的污染？
14.科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白。这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。
(1)分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的________、大小及形状不同，在电场中的________不同而实现分离。
(2)可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的体外抗菌特性。抗菌实验所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供________和________。
(3)分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的________，确定该蛋白质的抗菌效果。
(4)细菌培养常用的接种方法有________________和________________。实验结束后，对使用过的培养基应进行________处理。
15．有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物。分析回答问题。
(1)培养基中加入的化合物A是________，为微生物的生长提供________，这种培养基属于________培养基。
(2)为了筛选出能产生纤维素酶的微生物，向培养基中加入________。
(3)在筛选出能产生纤维素酶的微生物之前，可用液体培养基培养，增加微生物的浓度。若获得纯净的菌株，常采用平板划线的方法进行接种，此过程所用的接种工具是________，操作时采用________灭菌的方法；还可用________方法操作。
(4)实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是
________________________________________________________________________。
16．某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。
(1)采样与培养：将采集的土样混匀后称取1 g,置于经过_______法灭菌处理的_______(填“固体”或“液体”)培养基中，28℃振荡培养。
(2)接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行________处理。之后，将菌液涂布接种于以________为唯一碳源的固体培养基上，30℃条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈________状态放置。此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计________________作为空白对照。
(3)筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是________，则说明此种菌能够________________。从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用________法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化。
17.．请回答下列与大肠杆菌有关的问题：
(1)从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于________；它的同化作用类型是________。
(2)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。
成 分
含 量
蛋白胨
10.0 g
乳糖
5.0 g
蔗糖
5.0 g
K2HPO4
2.0 g
显色剂
0.2 g
琼脂
12.0 g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL，根据用途划分该培养基属于________培养基(选择、鉴别)。该培养基中的碳源是________。
(3)培养大肠杆菌时，常用的接种方法是平板划线法和________。为防止杂菌污染需要对培养基和培养皿进行________________。
(4)现有一升水样，用无菌吸管吸取1 mL水样至盛有9 mL无菌水的试管中，依次稀释103稀释度。各取0.1 mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为________。
(5)以下微生物发酵生产特定产物时，所利用主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的是________。
A．制作果酒 B．由果酒制作果醋
C．制作泡菜 D．制作腐乳
(6)利用培养基不仅可以分离培养微生物，也可以进行植物组织培养。与微生物培养明显不同的是，用于组织培养的培养基中还需要加入________。
18．苹果醋是指以苹果汁经发酵而成的苹果原醋，再兑以苹果汁等原料制成的饮品。既有淡淡的醋味，又有果汁的香甜，喝起来非常爽口。苹果醋还能保健养生、消除疲劳、美容养颜，是目前大众非常喜爱的饮品。下图是苹果醋的制作流程简图，请据图回答：
＋―→
(1)为了提高该微生物的利用率，最好用________方法对其进行固定。若要检测是否产生了苹果酒可用________试剂进行检测。
(2)过程②中使用到的微生物是________，该微生物的代谢类型是________。该微生物可以从食醋中分离纯化获得，方法是：
第一步：配制培养基。该培养基必须含有微生物生长所需要的________________等基本营养成分。
第二步：对培养基用________________方法进行灭菌。
第三步：接种。微生物常用的接种方法有______________________________________。
第四步：培养。温度控制在________。
第五步：挑选符合要求的菌落。
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