1．限制性核酸内切酶EcoRⅠ对DNA的识别序列是5′GAATTC3′，当用它处理环状DNA分子时，可形成 (　　)。[Ks5u.com] A．两端相同的线性DNA，有黏性末端 B．两端相同的线性DNA，无黏性末端 C．两端不同的线性DNA，一端有黏性末端，一端无黏性末端 D．两种末端无法判断 解析　不同限制性核酸内切酶切割位点是不相同的，DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式，即黏性末端和平末端。如果是限制酶EcoRⅠ，则在它识别序列的中心轴线两侧进行切割，产生黏性末端；如果是限制酶SmaⅠ，则在它识别序列的中心轴线处切割，产生的是平末端。ks5u.com 答案　A 2．右图为表达载体的模式图， 若结构X是表达载体所必需的， 则X最可能是 (　　)。 A．氨苄青霉素抗性基因 B．启动子 C．限制酶 D．DNA连接酶 解析　启动子是该表达载体所必需的，功能是启动插入基因的转录过程。氨苄青霉素抗性基因可以作为标记基因，但不是必须用它作标记基因。限制酶和DNA连接酶都不是表达载体所需要的。 答案　B 3．(2012·北京—黄冈冲刺卷)如图是利用基因工程技术培育转基因植物，生产可食用疫苗的部分过程示意图，其中Pst Ⅰ、Sma Ⅰ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性内切酶。下列说法错误的是 (　　)。
A．图示过程是基因工程的核心步骤 B．表达载体构建时需要用到限制酶Sma Ⅰ C．抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来 D．除图示组成外，表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构 解析　图示过程为基因表达载体的构建过程，是基因工程中的核心步骤。构建过程中需要将目的基因完整切割下来，此时要用到限制酶Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ。抗卡那霉素基因是标记基因，目的是便于鉴定和筛选含有目的基因的细胞。基因表达载体包括启动子、目的基因、终止子和标记基因等。[高考资源网] 答案　B 4．下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、Hind Ⅲ、Sma Ⅰ直线所示为三种限制酶的酶切位点。 据图回答下面的问题。
(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。 (2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是________(填字母代号)。 A．启动子 B．tetR[高考资源网] C．复制原点 D．ampR[Ks5u.com] (3)过程①可采用的操作方法是________(填字母代号)。 A．农杆菌转化 B．大肠杆菌转化 C．显微注射 D．细胞融合[高考资源网KS5U.COM] (4)为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用________(填字母代号)技术。 A．核酸分子杂交 B．基因序列分析 C．抗原—抗体杂交 D．PCR 解析　(1)由图示可知：需用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因，因酶切后tetR四环素抗性基因结构被破坏而ampR结构完好，故用含氨苄青霉素的选择培养基可筛选含有重组载体的大肠杆菌。(2)启动子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶识别和结合的位点，可调控基因的特异性表达。(3)过程①表示把重组载体导入受体细胞的过程，当受体细胞为动物细胞时，常采用显微注射法。(4)人乳铁蛋白基因是否成功表达，关键看是否有其表达产物即人乳铁蛋白，可用抗原—抗体杂交法检测该蛋白是否存在。 答案　(1)HindⅢ和BamHⅠ　氨苄青霉素　(2)A (3)C　(4)C 课堂小结

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